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    大鼠肝臟過氧化物的測定

    添加日期:2015年03月31日 關鍵字: 點擊次數:726 次

    導讀:大鼠肝臟過氧化物的測定

      【目的】

      1、學習測定過氧化脂質的實驗方法

      2、觀察藥物的抗氧化作用

      【原理】

           自由基可使脂類形成過氧化物。過氧化脂質的二級分解產物為丙二醛,它與硫代巴比妥酸反應生成粉紅色化合物,可以通過比色的方法對其濃度進行測定。又因四乙氧基丙烷在上述反應的同一條件下也能生成丙二醛,因此用四乙氧基丙烷為標準物質。

      【材料】

      1、動物:大鼠,體重250~300g,雌雄均可

      2、器材:恒溫振蕩器、離心機、組織勻漿機、分光光度計、恒溫箱、定量移液管、離心試管、試管、燒杯、天平、鼠籠、注射器、記號筆

      3、藥品:0.2g/ml三氯乙酸、6.7mg/ml硫代巴比妥酸、四乙氧基丙烷、生理鹽水

      【方法】

      1、制備肝勻漿:取大鼠稱重后斷頭處死,取出肝臟,用濾紙吸去殘血,剪成小碎塊,稱取5g,加生理鹽水至100ml,用組織勻漿機勻漿(8000~10000r/min)。

      2、測定過氧化脂質:將離心試管編號,取新鮮大鼠肝勻漿(50mg/ml)1.5ml分別加入離心試管中。實驗管中加入待測藥物0.1ml,對照管中加入生理鹽水0.1ml,于37C°振蕩溫育1.5h,取出后加入1.5ml三氯醋酸。另外設空白對照管,溫育前加入1.5ml三氯醋酸,同上述兩種實驗管同樣溫育振蕩(此管作為比色計調零時使用)?;靹蚝箪o置10min,3000r/min離心10min。取上清液1.5ml,加1ml硫代巴比妥酸,沸水浴加熱10min,冷卻后在722分光光度計532nm波長處比色測定。

      3、在四乙氧基丙烷標準工作曲線上檢出與檢品相應的nmol/L再乘以68.89,即為nmol/g濕重組織的過氧化脂質含量。

      【結果】全班結果匯總,進行t檢驗。

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